科研專家對Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)講談

    根據(jù)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，大家都或多或少掌握了一些小技巧。zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是受整個(gè)操作過程及試劑本身影響的，所系還要多學(xué)習(xí)，多參考，讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加。Elisa檢測系統(tǒng)是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段，有著十分重要的作用。下面是上海恒遠(yuǎn)生物科研專家對Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)講談：

一、包被原的性質(zhì)很重要

    蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被。

    1.親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

    2.脂類物質(zhì)：可將其在有機(jī)溶劑中溶解后加入Elisa板孔中，開蓋置冰箱或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。

    3.小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

二、Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)包被液的選擇

    一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

三、Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)封閉

    繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥Elisa后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用(5%-10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐。

    zui后上海恒遠(yuǎn)特別提醒，每次做盡量要把陰陽空三個(gè)對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。購買我公司Elisa試劑盒，有任何疑問都可業(yè)務(wù)員，我們將提供全程！