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技術(shù)服務(wù):相對定量SYBR Green I 染料法

更新時間:2013-09-10   點(diǎn)擊次數(shù):1740次

                                                    相對定量SYBR Green I 染料法

  熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號的變化實(shí)時檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。康為世紀(jì)提供利用熒光定量PCR的方法對樣品中的基因表達(dá)情況進(jìn)行相對定量或定量分析的技術(shù)服務(wù)。
 

服務(wù)價格

相對定量SYBR GreenI 染料法

¥200/樣品•基因

4周

服務(wù)內(nèi)容
  相對定量 (mRNA表達(dá)量分析)
  基因表達(dá)的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時分別進(jìn)行定量,然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進(jìn)行比較,可以對不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。內(nèi)參基因通常選用表達(dá)量相對恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通過同時對內(nèi)參基因的實(shí)時檢測,可以對樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正,達(dá)到在嚴(yán)格意義上對樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。

  定量  
  定量首先必須構(gòu)建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品,本公司服務(wù)內(nèi)容為采用TA克隆的方法構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作5個點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后,可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知濃度的檢測樣品進(jìn)行量 (起始拷貝數(shù))分析。

  SYBR Green I 染料法
  SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料,SYBR Green I只與雙鏈DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,熒光信號與雙鏈DNA分子數(shù)成正比,隨著擴(kuò)增產(chǎn)物增加而增加,熒光信號的強(qiáng)度代表了反應(yīng)體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。以SYBR Green I作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為染料法。

  TaqMan探針法
  PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累,因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。以Taqman探針作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為探針法。

服務(wù)優(yōu)勢
  ·先進(jìn)的儀器,的試劑,專業(yè)的團(tuán)隊,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
  ·免費(fèi)設(shè)計優(yōu)化引物,使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上,使相對定量結(jié)果更可靠。

樣品要求
  客戶需提供組織、細(xì)胞、血液等樣品材料,或純化好的總RNA或總DNA,反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品,具體要求如下:

材料種類

樣品要求

起始量

保存及運(yùn)輸方式

血液

新鮮血液及抗凝劑處理的全血

1ml

加入Trizol-80℃貯存,干冰運(yùn)輸

培養(yǎng)細(xì)胞

離心收集的細(xì)胞

1x107

動物組織

一般材料

100mg

-80℃或者液氮貯存,干冰運(yùn)輸

植物

一般材料

100mg

RNAOD260/OD280在1.9-2.1之間,完整性好>1ug-80℃貯存,干冰運(yùn)輸
DNAOD260/OD280在1.7-1.9之間,完整性好>1ug-20℃貯存,冰袋運(yùn)輸
cDNA內(nèi)參基因檢測成功>20ul


終產(chǎn)品
  ·一對引物(上游引物和下游引物)及其序列;
  ·完整實(shí)驗(yàn)報告;
  ·
服務(wù)說明
  ·客戶提供基因序列。
  ·如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗,使實(shí)驗(yàn)提前終止,已啟動的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域的解決方案提供商,全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈,致力于提供全方面的解決方案。目前建立了一系列技術(shù)服務(wù)平臺。我們致力于每位客戶的滿意和成功,為客戶提供zui有競爭力的產(chǎn)品和解決方案,持續(xù)為客戶創(chuàng)造zui大價值。

聯(lián)


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