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搞定ELISA試劑盒樣品方法上海恒遠(yuǎn)有妙招

更新時(shí)間:2016-07-27   點(diǎn)擊次數(shù):886次

  前言:樣品的處理在ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中是一項(xiàng)基本工作,也是影響實(shí)驗(yàn)的一大主要因素。常有ELISA操作員反映在處理樣品時(shí)出現(xiàn)溶血、凝集不全、受細(xì)菌污染等現(xiàn)象發(fā)生,我公司技術(shù)員特針對(duì)相關(guān)常見問題做出總結(jié),下面我們就來看看今天的內(nèi)容:搞定ELISA試劑盒樣品方法上海恒遠(yuǎn)有妙招:
一、標(biāo)本保存不當(dāng):
   在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時(shí)間過長(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
二、標(biāo)本溶血: 
   由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
三、標(biāo)本凝集不全:
   在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />四、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響:
   抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用。
五、標(biāo)本受細(xì)菌污染:
   因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
    做好了ELISA試劑盒樣品因素和操作因素之后,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性就容易的多了。我公司試劑盒提供全程指導(dǎo)服務(wù),為您的實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)到底!歡迎您我司業(yè)務(wù)員。 

                         

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