人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）

8 ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

4 ng/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

2 ng/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

1 ng/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

0.5 ng/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后

再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸

及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復

5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后

15分鐘以內(nèi)進行。